利用斑馬魚評價供試品抗皺功效

（一）Ⅰ型膠原蛋白基因相對表達量

【實驗原理】

膠原蛋白是人體皮膚中主要的胞外基質，其中Ⅰ型膠原蛋白的含量最多。皮膚皺紋的出現與膠原蛋白的正常合成和表達密切相關。斑馬魚具有與人高度保守的調控膠原蛋白的相關基因。通過檢測斑馬魚膠原蛋白基因RNA的相對表達量可以反映供試品的抗皺功效。

【實驗方法】

將受測試斑馬魚分成若干組，含正常對照組和化妝品組。其中正常對照組未經任何處理，化妝品組添加受試化妝品。加入化妝品24 h后，對每組斑馬魚進行收樣，使用試劑盒提取RNA，使用q-PCR檢測目的基因的轉錄水平，通過斑馬魚膠原蛋白基因相對表達量評價供試品抗皺功效。

【評價指標】Ⅰ型膠原蛋白基因相對表達量

【結果展示】

（*展示圖片僅供參考，實際實驗組別依據合同而定）

基因相對表達量：提供柱狀圖 

圖1. 斑馬魚體內col1a1a基因相對表達量

【評價結論】

供試品組斑馬魚體內col1a1b基因相對表達量與正常對照組相比明顯增多，說明該供試品具有抗皺功效。

【參考文獻】

[1] Duran I, Mari-Beffa M, Santamaria JA, et al. Actinotrichia collagens and their role in fin formation[J]. Dev Biol. 2011,354(1):160-172.

[2] Gistelinck C, Gioia R, Gagliardi A, et al. Zebrafish Collagen Type I: Molecular and Biochemical Characterization of the Major Structural Protein in Bone and Skin[J]. Sci Rep. 2016,6:21540.

（二）尾鰭皺縮抑制率

【實驗原理】

斑馬魚皮膚結構與人體皮膚結構相似，紫外線照射后，皮膚結構中的膠原蛋白、彈性蛋白等將發(fā)生變化，使尾鰭皮膚產生皺縮。因此，可以利用斑馬魚評價化妝品對于因紫外線照射引起的皮膚皺紋的緩解作用。添加受試物后，在一定強度紫外線照射下，通過尾鰭面積的抑制率來分析受試物保護斑馬魚尾鰭變形的程度，從而評價其抗皺功效。

【實驗方法】

將斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組、化妝品組。正常對照組不做處理，模型對照組和化妝品組分別進行紫外光多次照射，孵育一段時間后，三組斑馬魚分別進行尾鰭拍照處理，分析斑馬魚尾鰭面積。通過斑馬魚尾鰭面積來評價抗皺功效。

【評價指標】尾鰭皺縮抑制率

【結果展示】

（*展示圖片僅供參考，實際實驗組別依據合同而定）

圖2.斑馬魚尾鰭損傷面積表型圖，紅色為分析區(qū)域

【評價結論】

經過各組斑馬魚對比實驗，與模型對照組相比，化妝品組尾鰭面積增加。2、本實驗證實了該化妝品具有抗皺作用。

【參考文獻】

[1] Chen YH, Wen CC, Lin CY, et al. UV-induced fin damage in zebrafish as a system for evaluating the chemopreventive potential of broccoli and cauliflower extracts[J]. Toxicol Mech Methods. 2011,21(1):63-69.

[2] Cheng CC, Chou CY, Chang YC, et al. Protective Role of Comfrey Leave Extracts on UV-induced Zebrafish Fin Damage[J]. J Toxicol Pathol. 2014,27(2):115-121.

[3] Tsai I T , Yang Z S , Lin Z Y , et al. Flavone is efficient to protect zebrafish fins from UV-induced damage[J]. Drug and Chemical Toxicology, 2012, 35(3):341-346.