利用細(xì)胞評價(jià)供試品增強(qiáng)皮膚屏障功效

【評價(jià)原理】

皮膚屏障主要由角質(zhì)層、結(jié)構(gòu)性脂類和皮膚脂膜構(gòu)成，皮膚屏障功能是皮膚的基本生理功能，包括滲透屏障，抗氧化屏障，抗菌屏障，UV屏障，機(jī)械屏障等，起保護(hù)機(jī)體內(nèi)各組織器官免受外界有害侵襲以及保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用。內(nèi)外源壓力條件，如衰老、炎癥、UV等都會(huì)導(dǎo)致角質(zhì)層的角質(zhì)細(xì)胞以及各種脂質(zhì)的組分、結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而導(dǎo)致皮膚屏障功能的降低。

與皮膚屏障功能密切相關(guān)的蛋白有FLG(filaggrin絲聚合蛋白)、TGM1(transglutaminase-1 轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶1)等。FLG是一種重要的表皮結(jié)構(gòu)蛋白，對角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)和功能起著至關(guān)重要的作用。FLG及其降解產(chǎn)物有助于皮膚水化、pH平衡、表皮屏障完整性和微生物防御。FLG缺乏會(huì)造成自然保濕因子(NMF)水平下降，導(dǎo)致角質(zhì)層水合作用減少，經(jīng)表皮水分流失(TEWL)增加，皮膚干燥。TGM1基因是表皮表達(dá)的三種TGM的主要亞型，TGM1編碼與膜相連的鈣依賴性硫醇酶，TGM 是一種催化?；D(zhuǎn)移反應(yīng)的酶，為球狀單體蛋白，能夠催化肽鏈上谷氨酰殘基的γ－?；w與Lys 殘基的ε－氨基反應(yīng)，生成ε- ( γ－Gln)－Lys 肽鍵, 從而使蛋白分子間或分子內(nèi)發(fā)生交聯(lián)，這種交聯(lián)較穩(wěn)定，可以抵抗蛋白酶的水解作用，是角質(zhì)形成細(xì)胞終末分化組成角質(zhì)包膜的關(guān)鍵步驟，是皮膚屏障功能的物質(zhì)基礎(chǔ)。

將受試物作用于永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT后檢測上述三種基因及蛋白的表達(dá)，可以評估供試品增強(qiáng)皮膚屏障的功能。

【實(shí)驗(yàn)方案】

接種6孔平板： 6×105個(gè)細(xì)胞/孔培養(yǎng)（37℃、5%CO2、24h）觀察細(xì)胞貼壁以后，去除培養(yǎng)液，用1mL D-Hanks輕柔沖洗細(xì)胞一次或兩次。給藥，分別設(shè)置空白組、陽性對照組（加50和100μm的WY14643，WY-14643是一種過氧化物酶體增殖物激活受體PPARα激動(dòng)劑，其對角質(zhì)形成細(xì)胞通透性屏障穩(wěn)態(tài)相關(guān)功能如上調(diào)表皮分化相關(guān)分子和脂質(zhì)合成的有益作用已被證實(shí)），按上述條件培養(yǎng)24h。提取總RNA，使用cDNA提取試劑盒，合成cDNA，最后利用RT-PCR進(jìn)行檢測。

評價(jià)指標(biāo)

TGM和FLG基因的表達(dá)

【結(jié)果展示】

1、TGM和FLG基因的表達(dá)柱狀圖（略）

評價(jià)結(jié)論

1、供試品可有效促進(jìn)TGM和FLG基因的表達(dá)，說明該供試品具有增強(qiáng)皮膚屏障功效。

參考文獻(xiàn)：

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