利用細胞劃痕實驗評價供試品的皮膚屏障修復功效

【評價原理】

隨著年齡的增加，皮膚接受外來環(huán)境（物理損傷，化學試劑等）的影響，造成皮 膚的日益老化，在老化的過程中，細胞的損傷逐漸積累，進一步加速了皮膚老化。人皮膚角質形成細胞（human immortalized keratinocytes, HACAT）是構成皮膚表皮層的主要細胞類型，并且具有表皮構成、創(chuàng)傷修復、細胞角化、細胞因子分泌和免疫監(jiān)視等功能，常被用于生物醫(yī)學領域作為體外皮膚研究的細胞系，例如皮膚修復愈合和防曬等，在傷口愈合的早期階段，表皮中角化形成細胞被激活，并遷移到創(chuàng)傷部位誘導傷口收縮，接著進行細胞增殖以皮膚修復重建。因此，角質形成細胞對于傷口愈合有重要作用。

利用人永生化角質形成細胞HaCaT建立劃痕實驗模型，檢測供試品是否對細胞具有促增殖及修復劃痕的作用，作為其是否具有修復皮膚損傷的輔助性依據。

【實驗方案】

將對數(shù)生長期的HaCat消化重懸后進行計數(shù)，接種6×105個細胞/孔培養(yǎng)（37℃、5%CO2、24h），分別設置空白組、陽性對照組和樣品組。

待細胞100%融合后，用槍頭比著載玻片，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜。劃痕結束后，用PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，對照組加入1%血清培養(yǎng)基，陽性對照組加入含100ng/ml EGF的1%血清培養(yǎng)基，實驗組加入含一定濃度受試物的1%血清培養(yǎng)基。放入37度5%CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。按0，6， 24小時取樣，拍照，計算愈合率：

【評價指標】

HaCaT細胞修復功效表型圖、愈合率

結果展示

圖1. 供試品對HaCaT細胞的修復功效表型圖

【評價結論】

1、據以上結果可知該供試品可以促進HaCat細胞增殖，初步判定其具有皮膚屏障修復功效。