斑馬魚基因敲除品系制備

服務(wù)簡介

1.基因敲除(Gene Knockout)

根據(jù)給定GeneID或Gene name，分析基因保守結(jié)構(gòu)域，在保守結(jié)構(gòu)域或客戶指定區(qū)域設(shè)計(jì)靶點(diǎn)并制備靶點(diǎn)gRNA，gRNA共注射使基因產(chǎn)生移碼突變，通過PCR篩選得到穩(wěn)定遺傳品系。

2. 基因敲除技術(shù)特點(diǎn)

2.1 通過將基因敲除斑馬魚品系與野生型相比較，研究者可以揭示特定基因的功能。

2.2 在基因組水平上將目標(biāo)基因敲除，遺傳背景干凈清晰，是研究基因功能的金標(biāo)準(zhǔn)。

服務(wù)流程

▲根據(jù)客戶提供的GeneID或Gene name進(jìn)行基因分析→▲mRNA和多個(gè)gRNA靶點(diǎn)的設(shè)計(jì)及合成→▲高效gRNA靶點(diǎn)的篩選及效率驗(yàn)證→▲F0代斑馬魚的可遺傳性篩選→▲雜合子F1代斑馬魚的基因型鑒定。

環(huán)特生物優(yōu)勢

成熟的基因敲除技術(shù)快速獲得穩(wěn)定品系；

多靶點(diǎn)共注射F0代驗(yàn)證基因功能。

斑馬魚敲除品系成功案例

1、基因分析

分析目的基因的保守結(jié)構(gòu)域；

2、靶點(diǎn)篩選

設(shè)計(jì)4個(gè)gRNA靶點(diǎn)，PCR檢測包含靶點(diǎn)的區(qū)域真實(shí)序列，顯微注射驗(yàn)證靶點(diǎn)效率；

3、大規(guī)模注射養(yǎng)殖F0

gRNA 注射，共養(yǎng)殖 F0 約 80 條用于后期Founder篩選；

4、Founder 篩選

F0代斑馬魚與野生型外交，收集48hpf的F1胚胎抽取基因組，PCR鑒定，測序結(jié)果在靶點(diǎn)位置出現(xiàn)雙峰的認(rèn)為產(chǎn)生突變，然后TA clone驗(yàn)證其可能產(chǎn)生的突變方式；

5、F1 代篩選

F1代斑馬魚剪尾篩選，TA clone驗(yàn)證突變方式：

    通過對測序圖譜的分析獲得突變方式為：-5bp，產(chǎn)生移碼突變的敲除斑馬魚；

    通過對測序圖譜的分析獲得突變方式為：-4-3bp，產(chǎn)生移碼突變的敲除斑馬魚模型。

參考文獻(xiàn)

Hwang WY, Fu Y, et al.. Nat Biotechnol. 2013 Mar;31(3):227-9.pdf

Hoshijima K, Jurynec MJ, et al. Dev Cell. 2016 Mar 21;36(6):654-67.pdf

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