利用斑馬魚模型評價保健食品發(fā)育毒性與致畸性風(fēng)險

【評價原理】

斑馬魚胚胎在母體外發(fā)育，從合子期到孵化期僅72小時，且發(fā)育的完整過程均是透明的，利于實時觀察和檢測。斑馬魚幼魚長3~4毫米，擁有6-384孔板的高通量檢測體系，可實現(xiàn)低費(fèi)-高效篩選。斑馬魚與人類基因同源性達(dá)到87%，用于保健食品的體內(nèi)快速評價實驗結(jié)果可比性強(qiáng)。故可以利用斑馬魚早期各個階段的發(fā)育形態(tài)，準(zhǔn)確高效的確定保健食品暴露在胚胎中的毒性，廣泛應(yīng)用于保健食品的發(fā)育毒性與致畸性研究。

實驗結(jié)束后，在顯微鏡下觀察并記錄各濃度組織器官反應(yīng)及死亡情況，用來保健食品對斑馬魚的毒性，并對典型毒性器官進(jìn)行拍照。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成兩組，分別是正常對照組和保健食品組。其中正常對照組為標(biāo)準(zhǔn)稀釋水處理組，保健食品組按照既定濃度攝入了不同濃度的待測保健食品（待測保健食品通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。

在保健食品暴露過程中，每天觀察記錄各個濃度組斑馬魚的死亡情況，并及時挑除死魚。實驗結(jié)束后，統(tǒng)計斑馬魚死亡情況并使用OriginPro 8軟件擬合數(shù)據(jù)曲線，獲得保健食品的最大非致死濃度（MNLC）和LC10。

保健食品暴露一段時間后，我們在顯微鏡下觀察記錄斑馬魚身體各個指標(biāo)的情況并對典型毒性器官進(jìn)行拍照。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚發(fā)最大非致死濃度（MNLC）和LC10摸索數(shù)據(jù)擬合圖

可以看到，該保健食品的MNLC為313 μg/mL，LC10為350 μg/mL。

圖2. 斑馬魚發(fā)育毒性與致畸性表型圖

H=Heart;J=Jaw;In=Intestinal tract;L=Liver;Y=Yolk sac;E=Eye

可以看到，保健食品組較正常對照組出現(xiàn)卵黃囊吸收延遲、心包水腫、體長變短、眼變小和肝變形。

【評價結(jié)論】

1.該保健食品的MNLC為313 μg/mL，LC10為350 μg/mL，誘發(fā)斑馬魚卵黃囊吸收延遲、心包水腫、體長變短、眼變小和肝變形。

2.本實驗證實了該保健食品對斑馬魚有發(fā)育毒性與致畸性風(fēng)險。