利用斑馬魚模型評價細菌性肺炎防治作用

【評價原理】

斑馬魚的鰾從器官進化、組織結(jié)構(gòu)以及生物學(xué)等多個層面都類似于哺乳動物的肺泡。

細菌性肺炎：注射給予LPS建立斑馬魚細菌性肺炎模型。LPS是脂質(zhì)和多糖的復(fù)合物，來源于革蘭氏陰性菌細胞壁的外膜，是內(nèi)毒素的主要成分。接觸一定量的LPS會引起機體支氣管炎、肺炎、肝炎及脂多糖血癥。

通過使用轉(zhuǎn)基因中性粒細胞綠色熒光斑馬魚和轉(zhuǎn)基因巨噬細胞綠色熒光斑馬魚，在熒光顯微鏡下可以直接觀察斑馬魚中性粒細胞和巨噬細胞，并分時間點視頻記錄巨噬細胞和中性粒細胞溢出血管情況，使用實時熒光定量PCR儀可獲得基因表達水平，通過制作組織病理切片觀察斑馬魚魚鰾部位的病理結(jié)構(gòu)變化。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和服用抗炎藥組。其中，模型對照組與抗炎藥組都注射了等量的LPS建立細菌性肺炎模型?？寡姿幗M在注射了LPS的同時攝入吲哚美辛之類的抗肺炎抗炎藥。

服用一段時間抗肺炎抗炎藥后，我們在熒光顯微鏡下拍攝斑馬魚中性粒細胞和巨噬細胞的數(shù)量，并分時間點視頻記錄巨噬細胞和中性粒細胞溢出血管情況，用實時熒光定量PCR儀檢測TNF-α、IL-1β值，同時制作成病理切片觀察魚鰾部位的病理結(jié)構(gòu)變化。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚中性粒表型圖。（黃色虛線區(qū)域為魚鰾，綠色熒光顆粒為中性粒細胞）

可以看到，抗炎藥組斑馬魚魚鰾位置處的中性粒細胞聚集情況明顯改善。

圖2. 斑馬魚巨噬細胞表型圖。（黃色虛線區(qū)域為魚鰾，綠色熒光為巨噬細胞）

可以看到，抗炎藥組斑馬魚魚鰾位置處的巨噬細胞聚集情況明顯改善。

圖3. TNF-α基因表達水平。（與模型對照組比較，*p < 0.05）

可以看到，抗炎藥組能顯著抑制斑馬魚的炎癥基因TNF-α表達水平。

圖4. IL-1β基因表達水平。（與模型對照組比較，**p < 0.01）

可以看到，抗炎藥組能顯著抑制斑馬魚的炎癥基因IL-1β表達水平。

圖5. 魚鰾部位病理切片

從病理切片中能看出來，抗炎藥組斑馬魚魚鰾病理結(jié)構(gòu)與正常對照組相似，未出現(xiàn)模型對照組滲入的炎性細胞明顯增多的情況。

【評價結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，抗炎藥組能顯著抑制中性粒細胞和巨噬細胞的聚集，能顯著抑制炎癥基因表達水平，能改善炎性浸潤情況。

2.本實驗證實了吲哚美辛具有顯著的細菌性肺炎防治作用。