利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)病毒性肺炎防治作用

【評(píng)價(jià)原理】

斑馬魚的鰾從器官進(jìn)化、組織結(jié)構(gòu)以及生物學(xué)等多個(gè)層面都類似于哺乳動(dòng)物的肺泡。

病毒性肺炎：注射給予聚肌胞——poly（i:c）建立斑馬魚病毒性肺炎模型。poly（i:c）的雙鏈RNA結(jié)構(gòu)非常類似于病毒或病毒復(fù)制過程中形成的雙鏈RNA，所以poly（i:c）類似某些病毒，具有很強(qiáng)的干擾素誘生作用。

通過使用轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞綠色熒光斑馬魚和轉(zhuǎn)基因巨噬細(xì)胞綠色熒光斑馬魚，在熒光顯微鏡下可以直接觀察斑馬魚中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，并分時(shí)間點(diǎn)視頻記錄巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞溢出血管情況，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀可獲得基因表達(dá)水平，通過制作組織病理切片觀察斑馬魚魚鰾部位的病理結(jié)構(gòu)變化。

【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測(cè)試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和服用抗炎藥組。其中，模型對(duì)照組與抗炎藥組都注射了等量的聚肌胞——poly（i:c）建立病毒性肺炎模型?？寡姿幗M在注射了poly（i:c）的同時(shí)攝入吲哚美辛之類的抗炎藥。

服用一段時(shí)間抗炎藥后，我們?cè)跓晒怙@微鏡下拍攝斑馬魚中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的數(shù)量，并分時(shí)間點(diǎn)視頻記錄巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞溢出血管情況，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)TNF-α、IL-1β值，同時(shí)制作成病理切片觀察魚鰾部位的病理結(jié)構(gòu)變化。

【結(jié)果展示】

可以看到，抗炎藥組斑馬魚魚鰾位置處的巨噬細(xì)胞聚集情況明顯改善。

圖3. TNF-α基因表達(dá)水平。（與模型對(duì)照組比較，**p < 0.01）

可以看到，抗炎藥組能顯著抑制斑馬魚的炎癥基因TNF-α表達(dá)水平。

圖4. IL-1β基因表達(dá)水平。（與模型對(duì)照組比較，**p < 0.01）

可以看到，抗炎藥組能顯著抑制斑馬魚的炎癥基因IL-1β表達(dá)水平。

圖5. 魚鰾部位病理切片

從病理切片中能看出來，抗炎藥組斑馬魚魚鰾病理結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組相似，未出現(xiàn)模型對(duì)照組滲入的炎性細(xì)胞明顯增多的情況。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，抗炎藥組與模型對(duì)照組比較，能顯著抑制中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的聚集，能顯著抑制炎癥基因表達(dá)水平，能改善炎性浸潤情況。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了吲哚美辛具有顯著的病毒性肺炎防治作用。