斑馬魚模型評價抗血栓功效（苯肼誘導(dǎo)血栓模型）

【評價原理】

血栓性疾病是指血液在脈管腔或心腔內(nèi)形成的血塊，阻塞血管腔后，可引起血管血流明顯減少，甚至造成血流完全中斷，如在冠脈內(nèi)發(fā)生血栓，可造成心臟嚴重缺血，出現(xiàn)不穩(wěn)定心絞痛，甚至發(fā)生心肌梗死。血栓可發(fā)生于心血管的任何部位，以靜脈為多見。斑馬魚的造血遺傳網(wǎng)絡(luò)在進化上和人類高度保守，適合于血栓形成機制和治療藥物的評價。

苯肼可引起紅細胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸外化，產(chǎn)生超氧自由基，導(dǎo)致紅細胞脂膜的氧化損傷，并增加凝血酶的生成速率，誘導(dǎo)血栓形成；此外，苯肼還可促進炎癥發(fā)生，引起內(nèi)皮細胞功能障礙，導(dǎo)致高凝狀態(tài)，最終導(dǎo)致機體血栓形成。

軀干出現(xiàn)血栓后，回心血量便會減少。用鄰聯(lián)茴香胺染色法對紅細胞進行特異性染色（呈紅色），患有血栓的斑馬魚心臟部位的紅細胞較正常斑馬魚明顯減少，由于斑馬魚血液系統(tǒng)發(fā)育過程透明的特點，在解剖顯微鏡下可以觀察到。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和抗血栓藥物組。其中正常對照組未攝入苯肼，模型對照組與藥物組都攝入了等量的苯肼（苯肼通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）?？寡ㄋ幬锝M在加入苯肼的同時攝入阿司匹林、氯吡格雷之類的抗血栓藥物。

服用一段時間抗血栓藥物后，我們對斑馬魚整體做紅細胞特異性染色，最終分析斑馬魚的紅細胞數(shù)量（染色強度）。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚血栓表型圖（綠色虛線區(qū)域為心臟，心臟內(nèi)紅色為紅細胞）

可以看到，模型對照組紅細胞數(shù)量（染色強度）較正常對照組明顯減少，服用抗血栓藥物組的紅細胞數(shù)量（染色強度）與正常對照組比較相似，沒有明顯的紅細胞減少情況。

【評價結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，服用抗血栓藥物組的心臟紅細胞數(shù)量與未攝入苯肼的正常對照組相似，并未出現(xiàn)模型對照組的心臟紅細胞數(shù)量減少的情況。

本實驗證實了阿司匹林和氯吡格雷等具有顯著的抗血栓功效。