【評價原理】
腎臟是人體的重要器官,,發(fā)揮著從血液中濾過代謝廢物并維持體內(nèi)正常酸堿和滲透壓平衡的重要作用。斑馬魚的腎臟與哺乳動物腎臟的發(fā)育及疾病的發(fā)生、發(fā)展存在很多相似之處，涉及的許多基因具有高度保守性。因此，斑馬魚適合用于評價保護(hù)腎臟功效。馬兜鈴酸主要損傷腎小管上皮細(xì)胞，導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化及腎萎縮，并出現(xiàn)低分子蛋白尿、嚴(yán)重貧血癥狀，被稱為“馬兜鈴酸腎病”。在人體和斑馬魚上，馬兜鈴酸均可誘發(fā)腎性水腫和腎臟形態(tài)功能異常，引起不可逆性腎損傷并至死亡。
評價保護(hù)腎臟功效有兩個指標(biāo)：1. 腎性水腫發(fā)生率。由于斑馬魚通體透明，腎性水腫可以明顯的被觀察到。2. 腎小球濾過率。通過注射熒光物質(zhì)，正常斑馬魚可將熒光物質(zhì)排出體外，腎小球濾過功能損傷的斑馬魚不能將熒光物質(zhì)排出體外。觀察斑馬魚全身熒光強(qiáng)度可分析腎小球濾過率。
【實驗方案】
我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和腎保護(hù)劑組。其中正常對照組未攝入馬兜鈴酸，模型對照組和腎保護(hù)劑組都攝入了等量的馬兜鈴酸（馬兜鈴酸通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。腎保護(hù)劑組在攝入馬兜鈴酸的同時攝入山牡荊水提取物之類的腎保護(hù)劑。檢測腎小球濾過率的斑馬魚在實驗過程中需額外靜脈注射熒光物質(zhì)。
服用一段時間腎保護(hù)劑后，1.統(tǒng)計斑馬魚腎性水腫的發(fā)生率，2.用熒光顯微鏡拍照，通過斑馬魚全身熒光強(qiáng)度分析腎小球濾過率。
【結(jié)果展示】
圖1. 腎性水腫表型圖。（紅色箭頭指向腎性水腫）
可以看到，腎保護(hù)劑組與正常對照組比較相似，無明顯的腎性水腫。
圖2. 斑馬魚腎小球濾過率評價表型圖。（紅色代表未排出體外的熒光物質(zhì)）
可以看到，腎保護(hù)劑組可以增加斑馬魚腎小球濾過率，顯示為熒光強(qiáng)度比模型對照組弱。
【評價結(jié)論】
1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，腎保護(hù)劑組斑馬魚與未攝入馬兜鈴酸的正常對照組相似，腎性水腫發(fā)生率與模型對照組相比減少，腎保護(hù)劑組斑馬魚腎小球濾過率與模型對照組相比增加，未出現(xiàn)模型對照組腎臟損傷的情況。
2.本實驗證實了山牡荊水提取物具有明顯的保護(hù)腎臟功效。
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