斑馬魚模型評價改善貧血功效（苯肼誘導(dǎo)溶血性貧血模型）

【評價原理】

貧血是指人體外周血紅細(xì)胞容量減少，低于正常范圍下限的一種常見的臨床癥狀。溶血性貧血是由于紅細(xì)胞的破壞增速、增多，超過造血補(bǔ)償能力范圍時所發(fā)生的一種貧血。斑馬魚造血系統(tǒng)的形成，包括紅系、髓系、淋系及巨核系為主的造血系統(tǒng)，其相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路同人類有高度的同源性，這些特點(diǎn)使斑馬魚在人類造血系統(tǒng)和血液疾病的研究中有著更加廣泛的應(yīng)用。

研究表明，苯肼是一種溶血劑。苯肼作用于紅細(xì)胞膜，加速膜表面亮氨酸、賴氨酸及組氨酸的水解，使大量紅細(xì)胞迅速遭到破壞；同時可選擇性地氧化膜骨架和α珠蛋白，并將磷脂酰絲氨酸易位至紅細(xì)胞表面，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形性降低，增強(qiáng)紅細(xì)胞黏附到細(xì)胞外基質(zhì)的能力從而破壞循環(huán)血中的成熟紅細(xì)胞，使血紅蛋白變性聚集、形成Heinz小體，使得紅細(xì)胞的破壞速度遠(yuǎn)大于機(jī)體紅細(xì)胞再生的能力，最終導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生溶血性貧血。

用鄰聯(lián)茴香胺染色法對紅細(xì)胞進(jìn)行特異性染色（呈紅色），貧血斑馬魚心臟部位的紅細(xì)胞較正常斑馬魚明顯減少。由于斑馬魚早期出現(xiàn)血液循環(huán)時胚胎透明，在解剖顯微鏡下可以觀察到。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和改善貧血藥物組。其中正常對照組未攝入苯肼，模型對照組與改善貧血藥物組都攝入了等量的苯肼（苯肼通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用改善貧血藥物組先攝入生血寧之類的改善貧血藥物后，再加入苯肼。

服用改善貧血藥物一段時間后，再加入苯肼共同處理一段時間。我們對斑馬魚整體做紅細(xì)胞特異性染色，最終分析斑馬魚的紅細(xì)胞數(shù)量（染色強(qiáng)度）。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚紅細(xì)胞數(shù)量（染色強(qiáng)度）表型圖

（紅色虛線區(qū)域為心臟，心臟內(nèi)紅色為紅細(xì)胞）

可以看到，模型對照組紅細(xì)胞數(shù)量（染色強(qiáng)度）較正常對照組明顯減少，服用改善貧血藥物組的紅細(xì)胞數(shù)量（染色強(qiáng)度）與正常對照組比較相似，沒有明顯的紅細(xì)胞減少情況。

【評價結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，服用改善貧血藥物組的心臟紅細(xì)胞數(shù)量（染色強(qiáng)度）與未攝入苯肼的正常對照組相似，并未出現(xiàn)模型對照組的心臟紅細(xì)胞數(shù)量減少的情況。

2.本實驗證實了生血寧具有顯著改善貧血的功效。